NAVODILA

o uporabi kompleta reagentov za kolorimetrično določanje beljakovin v urinu in cerebrospinalni tekočini s pirogalol rdečo t

Komplet vključuje:

200 ml (2 x 100 ml P + 2 x 2 ml kalibrator)

500 ml (2 x 250 ml P + 2 x 5 ml kalibrator)

Načelo metode

Ko beljakovine medsebojno delujejo s pirogalol rdečo in

natrijev molibdat tvori obarvan kompleks,

katerih intenzivnost barve je sorazmerna koncentraciji

Vsebina kompleta

Reagent (P) - pirogalol rdeča raztopina v sukcinatu

pripravljen za uporabo.

Kalibratorji - Raztopine za nizko kalibriranje (0,20

g / l, ki se uporablja za določanje mikroproteinurije) in visoka

(0,50 g / l, ki se uporablja za določanje proteinurije)

koncentracija beljakovin, ki vsebuje 70% albumina in 30%

globulin, pripravljen za uporabo.

Skladiščni set - pri temperaturi 2-8 ° C v paketu

proizvajalca za ves rok uporabe.

Stabilnost reagenta in kalibratorjev

Po odprtju je reagent stabilen 6 mesecev, kalibratorji - 3 mesece. ko je skladiščen v tesno zaprti obliki pri temperaturi 2-8 ° C v temnem prostoru.

Normalne vrednosti

• urin - do 0,120 g / l (do 0,141 g / dan);
• cerebrospinalna tekočina (CSF) - 0,150-0,450 g / l.

Vzorci za analizo

Urin, ne hemoliziran CSF.

Priprava na analizo

1. CSF in urin centrifugiramo 10 minut pri 2700-4000 vrt / min.
2. Za analizo uporabite čiste, dobro oprane cevi. Preskus primernosti epruvet za analizo je odsotnost spremembe barve reagenta. Če reagent postane modri brez dodajanja vzorca, bodo rezultati določanja beljakovin precenjeni; zato spustite reagent in nato dodajte urin.
3. Pri pripravi metode je treba uporabiti nove kivete, ki niso obarvane z reagentom in reakcijskim vzorcem. Stare plastične kivete (motne, nepregledne) niso primerne za merjenje. Pred uporabo obdelajte kivete, ki so bile v uporabi, kot sledi: pustite 10 minut v pralni raztopini (200 ml 5% raztopine vodikovega peroksida ali 1 ml detergenta), nato sperite s pipo in destilirano vodo vsaj 10-krat. Komplet je primeren za analizo na biokemičnih polavtomatskih in avtomatskih analizatorjih.

Valovna dolžina analize: 598 (578-620) nm; dolžina optične poti: 10 mm; temperatura: 18-25 ° C.

Reagent in kalibrator je treba hraniti pri sobni temperaturi približno 30 minut pred analizo.

Postopek 1 (določanje proteinurije)

Vzorce je treba mešati, hraniti 10 minut pri sobni temperaturi (18-25 ° C). Izmerite optično gostoto poskusnega (E) in kalibracijskega (EC) vzorca proti kontrolnemu (slepemu) vzorcu. Barva je stabilna 1 uro.

KAJ MERAMO V METODI SURFOSALICILA?

V naši državi se turbidimetrična metoda z uporabo sulfosalicilne kisline (sulfosalicilna metoda), ki jo je prvi predlagal Kingsbury F, uporablja predvsem za določanje koncentracije beljakovin v urinu. B. in soavtorji leta 1926. Hkrati pa laboratoriji razvitih držav praktično ne uporabljajo te metode, zaradi česar laboratorijski nadzor kakovosti analize urinskih beljakovin kaže zmanjšanje koeficienta variacije. Tako je leta 1993 60% francoskih kliničnih diagnostičnih laboratorijev opravilo določanje koncentracije beljakovin v urinu z uporabo kolorimetrične metode z uporabo pirogalol rdeče barve (pirogalolova metoda) in le 10% z uporabo sulfosalicilne metode. Diagnostični kompleti za določanje urinskih beljakovin na osnovi pirogalolove metode izdelujejo tako znane družbe kot so Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Žal se v naši državi zaradi ekonomskih razlogov in delno zaradi pomanjkanja izkušenj kolorimetrične metode za določanje beljakovin v urinu še vedno zelo malo uporabljajo.

Postavlja se vprašanje, kako upravičeno je zavrnitev laboratorijev v razvitih državah, da bi uporabili preprosto in, kar je najpomembnejše, poceni metodo. Za razjasnitev tega vprašanja smo primerjali rezultate določanja koncentracije beljakovin v urinu bolnikov z dvema metodama: sulfosalicilno [1] in pirogalolno [2].

Postopek za merjenje koncentracije beljakovin z vsako metodo je naslednji.

Reagenti: 3% raztopina sulfosalicilne kisline, 0,9% raztopina natrijevega klorida,

Kalibrator (raztopina za umerjanje serumskega albumina, 50 g / l, v raztopini natrijevega klorida, 0,9% in natrijev azid, 0,095%) iz kompleta "Uni-Test - Total Protein" proizvajalca "Diakon DS" po naročilu „A / O Unimedu.

Oprema: spektrofotometer SF-2000, ki ga proizvaja OKB "Spectr".

Merilni potek: kvarčni kiveti z dolžino optične poti 1 cm dodamo 0,5 ml filtriranega urina in 1,5 ml 3% raztopine sulfosalicilne kisline in mešamo. Po 10 minutah smo izmerili optično gostoto na spektrofotometru pri valovni dolžini 595 nm proti slepemu vzorcu (kiveta z 0,5 ml urina in 1,5 ml 0,9% raztopine natrijevega klorida). Izračun koncentracije beljakovin smo izvedli v skladu z umeritvenim časovnim načrtom. Za njegovo konstrukcijo razredčite standardno raztopino humanega serumskega albumina v 0,9% raztopini natrijevega klorida s koncentracijami: 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 g / l. Za vsako od pripravljenih raztopin smo meritev izvedli na enak način kot z vzorcem urina. Kalibracijski graf je prikazan na sliki 1.

Sl. 1. Kalibracijska krivulja za določanje beljakovin v urinu s sulfosalicilno metodo.

Uporabljen je bil komercialni komplet, ki ga je izdelal Biocon Diagnostik (Nemčija) - Fluitest USP - Protein, ultra občutljiva metoda, ki temelji na rdečem kompleksu pirogalol-molibdat.

Reagenti: pirogalol rdeča, 0,06 mmol / l, natrijev molibdat, 0,04 mmol / l, sukcinatni pufer 50 mmol / l, pH 2,5, detergenti 2%; Kalibrator (raztopina za umerjanje serumskega albumina, 50 g / l, v raztopini natrijevega klorida, 0,9% in natrijev azid, 0,095%) iz kompleta "Uni-Test - Total Protein" proizvajalca "Diakon DS" po naročilu „A / O Unimedu. [3].

Oprema: biokemični fotometer StatFax 1904 Plus (“Awareness Technology inc.”, ZDA).

Umeritvena krivulja za opisano metodo z razmerjem vzorca / reagenta - 1 / 12,5 smo dobili s posebno pripravljenimi raztopinami serumskega albumina: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 g / l z redčenjem kalibratorja (50 g / l) z 0,9% raztopino natrijevega klorida (slika 2).

Slika 2. Kalibracijska krivulja za metodo pirogalol rdeče, Fluitest USP reagent, Biocon Diagnostik (Nemčija) z razmerjem vzorca / reagenta 1 / 12,5.

80 μl vzamemo iz vsake raztopine proteina in zmešamo z 1,0 ml reagenta; izmerjeni kot vzorci urina.

Sl. 3. Diagram primerljivosti rezultatov merjenja vsebnosti beljakovin v vzorcih urina s sulfosalicilnimi in pirogalolskimi metodami.

Kalibracijska krivulja za reagent, proizveden z Unimed A / O in Biocon Diagnostik, z razmerjem vzorca / reagenta 1/30, je bila pridobljena z uporabo posebej pripravljenih raztopin serumskega albumina: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6; 1.7; 1,75; 1,8; 1,85; 1.9; 2,0 g / l z redčenjem kalibratorja (50 g / l) z 0,9% raztopino natrijevega klorida (slika 4).

Sl. 4. Kalibracijske krivulje za Unimed reagent A / O (zgornji graf) in komplet Fluitest USP podjetja Biocon Diagnostik (spodnji graf) s razmerjem vzorca / reagenta 1/30.

Iz vsake raztopine beljakovin smo vzeli 50 μl in zmešali z 1,5 ml reagenta in izmerili kot vzorce urina.

V raziskavi smo za doseganje maksimalne občutljivosti pirogalolske metode uporabili njegovo modificirano visoko občutljivo varianto. Pri tem se je povečala količina dodanega urina. Merilni potek: 1 ml glavnega reagenta je bil dodan v vse epruvete, nato je bilo 80 μl destilirane vode (slepega vzorca) dodano prvi epruveti, 80 μl centrifugiranega urina je bilo dodanih v preostale epruvete, inkubirano pri sobni temperaturi 10 minut in merjena je bila optična gostota vzorca proti slepi 600 nm valovna dolžina in 650 nm diferenčni filter

Za primerjavo metod za določanje koncentracije beljakovin v urinu smo merili 60 vzorcev urina bolnikov s sulfosalicilno in pirogalolovo metodo.

Občutljivost metod za merjenje beljakovin v urinu smo ocenili s preučevanjem pripravljenih vodnih raztopin urina z nizkimi koncentracijami serumskega albumina (od 0 do 0,05 g / l). Za pirogalolne in sulfosalicilne metode smo raziskali tudi vrednosti nespecifične absorpcije zaradi barve vzorca urina. Za to smo izmerili optično gostoto vzorcev urina, pri čemer smo namesto sulfosalicilne kisline ali pirogalolnega reagenta dodali ekvivalentno količino soli.

Za oceno učinka matrice (urina) na rezultate sulfosalicilne metode smo izvedli naslednje eksperimente.

1) V vzorcih urina, ki ne vsebujejo beljakovin, smo v skladu s pirogalolnimi in sulfosalicilnimi metodami (n = 43) dodali humani serumski albumin v končni koncentraciji 0,4 g / l. Nato z uporabo zgornjih metod določimo koncentracijo beljakovin v pripravljenih vzorcih.

2) Vzorci urina (n = 16), ki imajo protein po metodi pirogalola, smo dvakrat razredčili z 0,9% raztopino natrijevega klorida. Dobljene vzorce smo ponovno pregledali s sulfosalicilno metodo, koncentracijo beljakovin smo ponovno izračunali za redčenje.

Rezultati raziskav in razprava

Študija vzorcev urina s specifičnimi koncentracijami albuminov je pokazala, da je bila najmanjša koncentracija albumina (občutljivost metode) 0,033 g / l za sulfosalicilno metodo in 0,012 g / l za metodo pirogalola.

Rezultati meritev v obliki diagrama primerljivosti rezultatov merjenja vsebnosti beljakovin v vzorcih urina z metodami sulfosalicilne (ordinatna os) in pirogalola (abscisa) so prikazani na sliki 3. Trdna poševna črta na grafu ustreza enakosti merilnih rezultatov z dvema metodama. Če sta obe metodi dali podobne vrednosti, bi morali biti točke na grafu združene v bližini polne črte. Podatki, prikazani na sl. 3, lahko opažamo tudi, da je sulfosalicilna metoda v vseh vzorcih urina dosledno pokazala nižje koncentracije beljakovin v primerjavi z metodo pirogalola.

Kot je pokazala študija, med rezultati, dobljenimi z uporabo sulfosalicilne in pirogalolske metode, ni prepričljive statistične povezave. Poleg tega je v primerjavi s pirogalolno metodo sulfosalicilna metoda v 95% vzorcev urina pokazala nižje vrednosti koncentracije beljakovin. Hkrati je v 86% primerov meritev s sulfosalicilno metodo dala podcenjene rezultate za dva ali večkrat v primerjavi s pirogalolno metodo.

Hkrati je sulfosalicilna metoda v nekaterih primerih pokazala prisotnost beljakovin v vzorcu zaradi temne barve ali povečane motnosti preučevanega urina. Ugotovljeno je bilo, da je pri določanju beljakovine s sulfosalicilno metodo (razmerje vzorec / reagent = 1/3) pri valovni dolžini 595 nm, prispevek vzorca urina zaradi njegove barve ali motnosti rezultatu od 0 do 0,247 g / l (povprečna vrednost - 0,031 g / l). Zato je treba priznati, da je pri uporabi sulfosalicilne metode obvezna uporaba kontrolnega vzorca (vzorec urina + slanica) za vsak vzorec urina. Pri določanju proteina s pirogalolno metodo barva ali stopnja motnosti vzorca urina ni vplivala na rezultat.

Eksperiment o oceni učinka matrice (urina) je pokazal, da je bila v skoraj vseh pripravljenih vzorcih urina, ki vsebujejo 0,4 g / l albumina, njegova koncentracija, določena s sulfo-salicilno metodo, pod 0,4 g / l v povprečju za 20% (mejne vrednosti) koncentracija beljakovin 0,29-0,34 g / l). Istočasno so pri merjenju koncentracije beljakovin v teh vzorcih s pirogalolno metodo rezultati za vse vzorce znašali od 0,40 do 0,46 g / l. Tudi pri oceni učinka matrice (urina) na rezultate merjenja koncentracije beljakovin s sulfosalicilno metodo je bilo ugotovljeno, da je bila v 5 od 16 dvojno razredčenih vzorcev urina koncentracija beljakovin za 15–33% višja kot v ustreznih nerazredčenih vzorcih. Za dokončno pojasnitev učinka matrice na rezultate sulfosalicilne metode je potrebno raziskati veliko število vzorcev urina.

Tako dobljeni podatki kažejo prednosti pirogalolove metode nad sulfosalicilno metodo zaradi njene večje občutljivosti in neobčutljivosti na moteče dejavnike, ni potrebe po praznem vzorcu urina, možnosti uporabe enega standarda za izdelavo kalibracijske krivulje in majhne količine urina za analizo. Prisotnost takšnih lastnosti nam omogoča, da priporočamo pirogalolno metodo za široko uporabo v laboratorijski praksi.

Iz pridobljenih podatkov sledi zaključek: rezultati merjenja koncentracije beljakovin v urinu s sulfosalicilno metodo niso primerljivi z rezultati, dobljenimi s pirogalolno metodo. To dejstvo je odgovor na vprašanje - zakaj laboratoriji razvitih držav ne uporabljajo sulfosalicilne metode. Uporabo te metode v nerazvitih državah očitno pojasnjuje dejstvo, da prevladuje cenovni faktor nad natančnostjo in diagnostičnim pomenom dobljenih rezultatov in glede na številke, predstavljene na sl. 3 rezultate, lahko rečemo, in prek zdrave pameti. Kdo potrebuje takšno analizo, če je pri koncentraciji beljakovin v urinu 0,3 g / l rezultat merjenja od 0,05 do 0,25 g / l? Kar se tiče cenovnega faktorja, potem, kot veste, škrtačo plača dvakrat. Napačni rezultati analize vodijo do napačne diagnoze in neučinkovitega zdravljenja bolnika. Glavna nevarnost uporabe sulfosalicilne metode je, da dobimo precej podcenjene vrednosti in redko zamudimo proteinurijo. Zato te metode ni mogoče uporabiti niti za pregledovanje.

Torej, kaj merimo s sulfosalicilno metodo? Metoda spada v razred turbidimetričnih, ki temelji na merjenju spremembe v prepustnosti svetlobe (D D) reakcijske zmesi zaradi sipanja svetlobe (motnosti). Pri detekciji beljakovin v urinu nastane motnost zaradi naslednjega procesa: molekule urinskih beljakovin v kislem mediju se denaturirajo iz kompaktne kroglaste oblike v ohlapno "nitasto" obliko. Hkrati se zmožnost nastajanja konglomeratov močno poveča (reakcija padavin) v beljakovinah. Posamezne beljakovinske molekule so manjše od valovne dolžine vidne svetlobe in jo zato zelo šibko razpršijo. Učinkovitost sipanja se dramatično poveča, ko se velikost nastalih konglomeratov beljakovinskih molekul približuje vrednosti 0,6 μm (valovna dolžina merilne svetlobe). Večja kot je koncentracija beljakovin v urinu, večje je število takih konglomeratov (centri za sipanje). Vendar je razmerje med optično gostoto D D, izmerjeno na fotometru, in koncentracijo beljakovin v urinu zelo kompleksno. V začetni fazi reakcije se oblikuje določena količina majhnih delcev beljakovin, nato se začnejo združevati v večje delce, koncentracija centrov sipanja pa se zmanjšuje, učinkovitost (presek) sipanja vsakega središča pa se povečuje. V vsakem trenutku imamo v reakcijski zmesi določeno število razpršilnih središč različnih velikosti. Pri visokih koncentracijah beljakovin v urinu lahko tvorijo velike beljakovinske delce, ki se oborijo, kar vodi do zmanjšanja optične gostote reakcijske zmesi.

Proces denaturacije proteinov in reakcija precipitacije sta odvisna od sestave medija, v katerem se pojavljata (pH, koncentracija različnih soli). Za kalibracijo metode uporabimo vodno raztopino humanega albumina z dodatkom 0,9% natrijevega klorida. Ko merimo koncentracijo beljakovin v urinu, ne vemo in ne upoštevamo niti pH urina niti njegove sestave soli. Prav tako ne upoštevamo dejstva, da različni proteini različno reagirajo v raztopini sulfosalicilne kisline. To pojasnjuje veliko razpršitev rezultatov meritev, predstavljenih na sl. 3. Bližje sestavo urina s sestavo kalibratorja, bolj natančen je rezultat merjenja. Vendar pa je zelo malo takih vzorcev urina. V večini primerov je sestava urina taka, da so rezultati meritev podcenjeni in pogosto zelo pomembni.

Slednje je potrjeno z zgoraj opisanim poskusom, pri katerem je bila koncentracija beljakovin merjena s sulfosalicilno metodo v nerazredčenih in dvakrat razredčenih vzorcih urina. Primerjava pridobljenih podatkov je pokazala, da redčenje urina (ob upoštevanju stopnje razredčitve) vodi do povečanja rezultatov meritev koncentracije beljakovin za 15-33%. To potrjuje pomemben vpliv sestave urina na rezultat določanja koncentracije beljakovin (matrični učinek).

Zakaj metoda pirogalola omogoča pridobitev natančnejših rezultatov merjenja koncentracije beljakovin v urinu? Prvič, zaradi večje raznolikosti redčenja vzorcev urina v reakcijski zmesi. Če je v sulfosalicilni metodi razmerje vzorca urina / reagenta 1/3, potem je v pirogalolni metodi lahko v območju od 1 / 12,5 do 1/60, odvisno od različice tehnike, ki bistveno zmanjša učinek sestave urina na merilni rezultat. Drugič, reakcija poteka v sukcinatnem pufru, to je pri stabilnem pH. In končno, načelo metode je, če je mogoče tako reči, preglednejše. Natrijev molibdat in pirogalol rdeča barva tvorita kompleks z beljakovinsko molekulo. To vodi do dejstva, da molekule barv v prostem stanju ne absorbirajo svetlobe pri valovni dolžini 600 nm, v kombinaciji z beljakovino, ki absorbira svetlobo. Tako se zdi, da vsako beljakovinsko molekulo označimo z barvilom in kot rezultat ugotovimo, da je sprememba optične gostote reakcijske zmesi pri valovni dolžini 600 nm edinstveno povezana s koncentracijo beljakovin v urinu.

Kot zaključek, najpomembnejše razlike med sulfosalicilno metodo za določanje beljakovin v urinu in metodo, ki uporablja pirogalol rdeče barvilo, so predstavljene v tabeli št.

Tab. 1. Primerjalne značilnosti dveh metod za določanje beljakovin v urinu (sulfosalicilna in pirogalolova metoda)

Določanje urinske beljakovine s pirogalol rdečo

Načelo metode temelji na fotometričnem merjenju optične gostote raztopine obarvanega kompleksa, ki nastane z medsebojnim delovanjem beljakovinskih molekul z molekulami kompleksa pirogalol rdeče barve in natrijevim molibdatom (kompleks Pyrogallol Red-Molybdate) v kislem mediju. Intenzivnost barve raztopine je sorazmerna z vsebnostjo beljakovin v preučevanem materialu. Prisotnost detergentov v reagentu zagotavlja enakovredno definicijo beljakovin različne narave in strukture.

Reagenti. 1) 1,5 mmol / l raztopine pirogalol rdeče (PGA): 60 mg PGA raztopimo v 100 ml metanola. Hraniti pri temperaturi 0–5 ° C; 2) 50 mmol / l raztopine sukcinatnega pufra pH 2,5: 5,9 g jantarne kisline (HOOC-CH₂–СН₂–COOH); 0,14 g natrijevega oksalata (Na₂C₂O₄) in 0,5 g natrijevega benzoata (C₆H₅COONa) raztopimo v 900 ml destilirane vode; 3) 10 mmol / l raztopine natrijevega molibdat kristalhidrata (Na₂Moo₄ × 2H₂O): 240 mg natrijevega molibdata raztopimo v 100 ml destilirane vode; 4) Delovni reagent: v 900 ml raztopine sukcinatnega pufra dodamo 40 ml raztopine PHC in 4 ml raztopine natrijevega molibdata. PH raztopine nastavimo na 2,5 z 0,1 mol / l raztopino klorovodikove kisline (HCl) in prostornino nastavimo na 1 1. Reagent v tej obliki je pripravljen za uporabo in je stabilen pri temnem prostoru in pri temperaturi 2–25 ° C za 6 mesecev; 5) 0,5 g / l standardne raztopine albumina.

Potek odločnosti. V prvo epruveto vnesemo 0,05 ml preučevanega urina, v drugo epruveto dodamo 0,05 ml standardne raztopine albumina in v tretjo epruveto (kontrolni vzorec) 0,05 ml destilirane vode, v te epruvete dodamo 3 ml delovnega reagenta. Vsebino epruvet se zmeša in po 10 minutah se vzorec in standard fotometrirajo proti kontrolnemu vzorcu pri valovni dolžini 596 nm v kiveti z dolžino optične poti 10 mm.

Izračun koncentracije beljakovin v analiziranem vzorcu urina se izvede po formuli:

pri čemer je C koncentracija beljakovin v analiziranem vzorcu urina, g / l; A_pr in a_st- ekstinkcija proučevanega vzorca urina in standardne raztopine albumina, g / l; 0,5 - koncentracija standardne raztopine albumina, g / l.

• barva raztopine (barvni kompleks) je stabilna eno uro;
• neposredno sorazmerno razmerje med koncentracijo beljakovin v vzorcu in absorpcijo raztopine je odvisno od vrste fotometra;
• kadar je vsebnost beljakovin v urinu nad 3 g / l, se vzorec razredči z izotonično raztopino natrijevega klorida (9 g / l) in določitev se ponovi. Pri določanju koncentracije beljakovin se upošteva stopnja razredčitve.

Zdravimo jetra

Zdravljenje, simptomi, zdravila

Pirogalol rdeča določitev beljakovin v urinu

26.02.2009

Kurilyak O.A.

Običajno se beljakovina izloča z urinom v sorazmerno majhni količini, običajno ne več kot 100-150 mg / dan.

Dnevna diureza pri zdravi osebi je 1000-1500 ml / dan; koncentracija beljakovin v fizioloških pogojih je 8–10 mg / dL (0,08–0,1 g / l).

Celotne beljakovine v urinu predstavljajo tri glavne frakcije - albumin, mukoproteini in globulini.

Albumin v urinu je delež serumskega albumina, ki je bil filtriran v glomerulih in ni bil reabsorbiran v ledvičnih tubulih; v normalnem izločanju albumina v urinu je manj kot 30 mg / dan. Drug pomemben vir beljakovin v urinu so ledvični tubuli, zlasti distalni del tubulov. Te tubule izločajo dve tretjini celotne količine beljakovin v urinu; od te količine približno 50% predstavlja Tamm-Horsfallov glikoprotein, ki ga izloča epitel distalnih tubulov in ima pomembno vlogo pri tvorjenju urinskih kamnov. Drugi proteini so v majhnih količinah prisotni v urinu in izhajajo iz nizko molekularnih proteinov plazme, filtriranih skozi renalni filter, ki se ne reabsorbirajo v ledvičnih tubulih, mikroglobulinah iz epitelija ledvičnih tubulov (RTE) ter prostatičnega in vaginalnega izcedka.

Proteinurija, to je povečanje vsebnosti beljakovin v urinu, je eden najpomembnejših simptomov, ki odražajo poškodbo ledvic. Vendar pa lahko številna druga stanja spremlja tudi proteinurija. Zato sta dve glavni skupini proteinurije: ledvična (resnična) in ekstrarenalna (napačna) proteinurija.

V ledvični proteinuriji beljakovina vstopi v urin neposredno iz krvi zaradi povečanja prepustnosti glomerularnega filtra. Ledvična proteinurija se pogosto pojavlja pri glomerulonefritisu, nefrozi, pielonefritisu, nefrosklerozi, ledvični amiloidozi, različnih oblikah nefropatije, na primer nefropatiji nosečnic, zvišana telesna temperatura, hipertenzija itd. Proteinurijo lahko najdemo tudi pri zdravih ljudeh po hudem fizičnem naporu, hipotermiji in psihičnem stresu. Pri novorojenčkih fiziološko proteinurijo opazimo v prvih tednih življenja in ko se astenija pojavi pri otrocih in mladostnikih, je ortostatska proteinurija (v pokončnem položaju telesa) možna v kombinaciji s hitro rastjo v starosti od 7 do 18 let.

V primeru napačne (ekstrarenalne) proteinurije je vir beljakovin v urinu mešanica levkocitov, eritrocitov, epitelijskih celic sečil. Razpad teh elementov, še posebej izrazit pri alkalnem urinu, vodi do vnosa beljakovin v urin, ki je že prestal ledvični filter. Še posebej visoka stopnja lažne proteinurije daje kri v urinu, z obilno hematurijo, lahko doseže 30 g / l in več. Bolezni, ki jih lahko spremlja ekstrarenalna proteinurija - urolitiaza, ledvična tuberkuloza, tumorji ledvic ali sečil, cistitis, pielitis, prostatitis, uretritis, vulvovaginitis.

Klinična razvrstitev vključuje blago proteinurijo (manj kot 0,5 g / dan), zmerno (od 0,5 do 4 g / dan) ali hudo (več kot 4 g / dan).

Večina bolnikov z ledvično boleznijo, kot je akutni glomerulonefritis ali pielonefritis, odkrije zmerno proteinurijo, vendar bolniki z nefrotičnim sindromom običajno dnevno izločajo več kot 4 g beljakovin v urinu.

Za kvantitativno določanje beljakovin se uporablja širok spekter metod, zlasti poenotena metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov, biuretna metoda, metoda sulfosalicilne kisline, metode, ki uporabljajo Coomassie modro barvo, pirogalol rdeče barvilo itd.

Uporaba različnih metod za določanje beljakovin v urinu je privedla do resne zmede pri razlagi meja norme vsebnosti beljakovin v urinu. Ker se v laboratorijih najpogosteje uporabljata 2 metodi - s sulfosalicilno kislino in pirogalol rdečim barvilom, obravnavamo problem pravilnosti meja normativov zanje. Z vidika sulfosalicilne metode v normalnem urinu vsebnost beljakovin ne sme presegati 0,03 g / l in s stališča pirogalola 0,1 g / l! Razlike so trikratne.

Nizke vrednosti normalne koncentracije beljakovin v urinu pri uporabi sulfosalicilne kisline zaradi naslednjih točk:

• kalibracijska krivulja temelji na vodni raztopini albumina. Urin v njegovi sestavi se zelo razlikuje od vode: pH, sol, spojine z nizko molekulsko maso (kreatinin, sečnina itd.). Kot rezultat, po Altshulerju, Rakovu in Tkachevu, je napaka pri določanju beljakovin v urinu lahko trikrat ali več! Tj pravilne rezultate je mogoče doseči le v primerih, ko ima urin zelo nizko specifično težo, njegova sestava in pH pa se približata vodi;
• večja občutljivost sulfosalicilne metode na albumin v primerjavi z drugimi beljakovinami (takrat, kot je navedeno zgoraj, albumin v normalnih vzorcih urina ni več kot 30% celotnega proteina urina);
• če se pH urina premakne na alkalno stran, se sulfosalicilna kislina nevtralizira, kar povzroči tudi zmanjšanje rezultatov določanja beljakovin;
• hitrost sedimentacije precipitatov je podvržena precejšnjim variacijam - pri nizkih koncentracijah beljakovin se obarjanje upočasni in zgodnja prekinitev reakcije vodi do podcenjevanja rezultata;
• hitrost reakcije obarjanja je v bistvu odvisna od mešanja reakcijske zmesi. Pri visokih koncentracijah beljakovin lahko močno tresenje cevi povzroči nastanek velikih kosmičev in njihovo hitro obarjanje.

Vse zgoraj navedene značilnosti metode vodijo do znatnega podcenjevanja koncentracije beljakovin, ki je določena v urinu. Stopnja nezadostnega poročanja je močno odvisna od sestave določenega vzorca urina. Ker metoda sulfosalicilne kisline podcenjuje koncentracijo beljakovin, je normalna meja za to metodo tudi 0,03 g / l, kar je približno trikrat prenizka v primerjavi s podatki v tujih referenčnih knjigah o klinični laboratorijski diagnostiki.

Velika večina laboratorijev v zahodnih državah je opustila uporabo sulfosalicilne metode za določanje koncentracije beljakovin v urinu in za ta namen aktivno uporablja metodo pirogalola. Pirogalolna metoda za določanje koncentracije beljakovin v urinu in drugih bioloških tekočinah temelji na fotometričnem principu merjenja optične gostote obarvanega kompleksa, ki nastane z medsebojnim delovanjem proteinskih molekul s pirogalolnim rdečim barvilom in molekulami kompleksa natrijevega molibdata.

Zakaj metoda pirogalola omogoča pridobitev natančnejših rezultatov merjenja koncentracije beljakovin v urinu? Prvič, zaradi večje raznolikosti redčenja vzorcev urina v reakcijski zmesi. Če je v sulfosalicilni metodi razmerje vzorca urina / reagenta 1/3, potem je v pirogalolni metodi lahko v območju od 1 / 12,5 do 1/60, odvisno od različice tehnike, ki bistveno zmanjša učinek sestave urina na merilni rezultat. Drugič, reakcija poteka v sukcinatnem pufru, to je pri stabilnem pH. In končno, za načelo metode lahko rečemo, da je bolj „pregledno“. Natrijev molibdat in pirogalol rdeča barva tvorita kompleks z beljakovinsko molekulo. To vodi do dejstva, da molekule barv v prostem stanju, ki ne absorbirajo svetlobe pri valovni dolžini 600 nm v kombinaciji z beljakovino, absorbirajo svetlobo. Tako se zdi, da vsako beljakovinsko molekulo označimo z barvilom in kot rezultat vidimo, da je sprememba optične gostote reakcijske zmesi pri valovni dolžini 600 nm jasno povezana s koncentracijo beljakovin v urinu. Poleg tega, ker je afiniteta pirogalol rdeče do različnih beljakovinskih frakcij skoraj enaka, metoda omogoča določitev celotnega proteina urina. Zato je meja normalnih vrednosti koncentracije beljakovin v urinu 0,1 g / l (navedena je v vseh sodobnih zahodnih smernicah za klinično in laboratorijsko diagnostiko, vključno s kliničnim priročnikom za laboratorijske teste, ki so jih uredili N. Tits).. Primerjalne značilnosti pirogalola in sulfosalicilnih metod za določanje beljakovin v urinu so predstavljene v tabeli 1.

V zaključku bi se rad še enkrat osredotočil na dejstvo, da ko laboratorij preide iz sulfosalicilne metode za določanje beljakovin v urinu na pirogalolno metodo, se meja normalnih vrednosti znatno poveča (od 0,03 g / l do 0,1 g / l!). Osebje laboratorija mora vsekakor obvestiti zdravnike, ker V tem primeru lahko diagnozo proteinurije naredimo le v primeru, ko vsebnost beljakovin v urinu presega 0,1 g / l.

3. Določanje beljakovin.

Načelo metode na osnovi koagulacije beljakovin v urinu v prisotnosti nitratne (ali 20% raztopine sulfosalicilne) kisline.

Napredek pri delu: 5 kapljic urina dodajte 1-2 kapljic dušikove (ali sulfosalicilne) kisline. V prisotnosti beljakovin v urinu se pojavi motnost.

Tabela Odkrivanje patoloških sestavin urina.

Opomba: v prisotnosti glukoze in beljakovin v pregledanem urinu se določi njihova kvantitativna vsebina.

Kvantitativna določitev beljakovin v urinu s kolorimetrično metodo s pirogalol rdečo.

Načelo metode: Ko beljakovina medsebojno deluje s pirogalol rdečim in natrijevim molibdatom, se oblikuje barvni kompleks, intenzivnost barve, ki je sorazmerna koncentraciji beljakovin v vzorcu.

Reagenti: Delovni reagent - raztopina pirogalol rdeče v sukcinatnem pufru, raztopina kalibracijske beljakovine s koncentracijo 0,50 g / l

Vzorci zmešamo, držimo 10 minut. pri sobni temperaturi (18-25 ° C). Izmerite izkušeno optično gostoto (D_op) in umeritveni vzorec (D_doproti kontrolnemu vzorcu pri λ = 598 (578-610) nm. Barvanje je stabilno 1 uro.

Izračun: koncentracija beljakovin v urinu (C) g / l se izračuna po formuli:

Normalne vrednosti: do 0,094 g / l, (0,141 g / dan)

Kvantitativna določitev glukoze v urinu z metodo glukozne oksidaze.

Načelo metode: Ko se D-glukoza oksidira z atmosferskim kisikom pod vplivom glukozne oksidaze, nastane ekvimolarna količina vodikovega peroksida. Pod vplivom peroksidaze vodikov peroksid oksidira kromogene substrate (zmes fenola in 4 aminoantipirina - 4ААP) z nastankom obarvanega izdelka. Intenzivnost barve je sorazmerna z vsebnostjo glukoze.

2 N₂Oh₂ + fenol + 4AAP barvana spojina + 4N₂Oh

Napredek pri delu1 ml delovne raztopine in 0,5 ml fosfatnega pufra vnesemo v dve epruveti. V prvo epruveto dodamo 0,02 ml urina in v drugo dodamo 0,02 ml kalibratorja (umerjanje, standardna raztopina glukoze, 10 mmol / l). Vzorci se mešajo, inkubirajo 15 minut pri temperaturi 37 ° C v termostatu, optična gostota pa se meri z eksperimentalnimi (D)._op) in umerjanje (D_do) vzorce proti delovnemu reagentu pri valovni dolžini 500-546 nm.

Vsebnost glukoze v dnevnem urinu se določi z mmol / dan z množenjem rezultata, dobljenega z dnevnim volumnom urina.

Opomba Ko je vsebnost sladkorja v urinu več kot 1%, je treba razredčiti.

Trenutno biokemični laboratoriji uporabljajo poenoteno ekspresijsko metodo za analizo urina za glukozo z uporabo testa glukoze test reaktivnega glukoze ali z uporabo kombiniranih testnih trakov za pH, beljakovine, glukozo, ketonska telesa in kri. Testni trakovi se potopijo v posodo z urinom 1 sekundo. in primerjajte barvo na lestvici.

Zdravnik Hepatitis

zdravljenje jeter

Norm proteina v urinu pirogalolova metoda

Zdrav človek proizvede 1,0-1,5 litra urina na dan. Vsebnost 810 mg / dl beljakovin je fiziološki pojav. Dnevni vnos beljakovin v urinu 100-150 mg ne sme povzročiti suma. Globulin, mukoprotein in albumin so tisti, ki tvorijo celotne beljakovine v urinu. Velik iztok albumina kaže na kršitev filtracijskega procesa v ledvicah in se imenuje proteinurija ali albuminurija.

Vsaka snov v urinu dobi "zdravo" hitrost in če indeks beljakovin niha, lahko to kaže na patologijo ledvic.

Analiza urina vključuje uporabo prvega (zjutraj) odmerka ali jemanja dnevnega vzorca. Slednje je bolje oceniti raven proteinurije, saj ima vsebnost beljakovin izrazito dnevno nihanje. Urina se čez dan zbira v eni posodi, izmeri skupni volumen. Za laboratorij, ki izvaja analizo beljakovin v urinu, zadostuje standardni vzorec (od 50 do 100 ml) iz te posode, preostali znesek pa ni potreben. Za več informacij se izvede dodatni test na Zimnitsky, ki kaže, ali so urinski indikatorji na dan normalni.

Nazaj na kazalo

Beljakovina v urinu je normalna pri odraslih, ne sme presegati 0,033 g / l. Hkrati dnevna količina ne presega 0,05 g / l. Pri nosečnicah je delež beljakovin v dnevnem urinu večji - 0,3 g / l. In zjutraj je urin enak - 0,033 g / l. Standardi beljakovin se razlikujejo v splošni analizi urina in pri otrocih: 0,036 g / l za jutranji in 0,06 g / l na dan. Najpogosteje laboratoriji opravijo analizo z uporabo dveh metod, ki kažejo, koliko beljakovinskih frakcij je v urinu. Zgornje normalne vrednosti veljajo za analizo, izvedeno s sulfosalicilno kislino. Če bi uporabili pirogalolno rdečo barvilo, bodo vrednosti trikrat različne.

Nazaj na kazalo

Vzrok beljakovin v urinu so lahko patološki procesi v ledvicah:

• filtracija v ledvičnih glomerulih gre napačno;
• absorpcija v beljakovinskih tubulah je oslabljena;
• Nekatere bolezni močno obremenjujejo ledvice - ko se beljakovine v krvi povišajo, ledvice preprosto nimajo časa za filtriranje.

Preostali razlogi se ne štejejo za ledvice. Tako se razvija funkcionalna albuminurija. Beljakovina pri analizi urina se pojavi pri alergijskih reakcijah, epilepsiji, srčnem popuščanju, levkemiji, zastrupitvi, mielomu, kemoterapiji, sistemskih boleznih. Najpogosteje bo ta indikator v analizi bolnikov prvi zvonec hipertenzivne bolezni.

Povečanje količine beljakovin v urinu je lahko posledica dejavnikov, ki niso patološki, zato bodo potrebne dodatne analize.

Kvantitativne metode za določanje beljakovin v urinu dajejo napake, zato je priporočljivo izvesti več analiz in nato uporabiti formulo za izračun pravilne vrednosti. Vsebnost beljakovin v urinu se meri vg / l ali mg / l. Ti indikatorji beljakovin omogočajo določitev ravni proteinurije, predlagajo razlog, ocenijo prognozo in določijo strategijo.

Nazaj na kazalo

Za popolno delovanje telesa je potrebna stalna izmenjava krvi in ​​tkiv. Možno je le, če je v krvnih žilah prisoten določen osmotski tlak. Proteini krvne plazme vzdržujejo takšno raven tlaka, ko nizko molekularne snovi z lahkoto preidejo iz medija z visoko koncentracijo v medij z nižjo koncentracijo. Izguba beljakovinskih molekul vodi v sproščanje krvi iz njenega ležišča v tkivo, kar je preobremenjeno z močnim edemom. To je manifestacija zmerne in hude proteinurije.

Začetne faze albuminurije so asimptomatske. Pacient posveča pozornost samo manifestacijam osnovne bolezni, ki je vzrok beljakovin v urinu.

Trace proteinurija se imenuje povečanje ravni beljakovin v urinu zaradi uporabe določenih produktov.

Analiza urina se zbere v čisto, posneto posodo. Pred zbiranjem stranišča je prikazana presredka, ki jo je treba umiti z milom in vodo. Ženskam svetujemo, da vagino zaprejo s kosom bombaža ali tamponom, tako da izcedek iz nožnice ne vpliva na rezultat. Na predvečer je bolje ne piti alkohola, mineralne vode, kave, pikantnega, slanega in živila, ki daje urinu barvo (borovnice, pesa). Močni fizični napori, dolga hoja, stres, vročina in znojenje, prekomerno uživanje beljakovinskih živil ali zdravil pred dajanjem urina povzročajo pojav beljakovin v analizi urina popolnoma zdrave osebe. Ta dopustni pojav se imenuje sledilna proteinurija.

Nazaj na kazalo

Bolezni ledvic, ki vodi do izgube beljakovin:

• Amiloidoza. Normalne celice v ledvicah so nadomeščene z amiloidi (kompleks protein-saharid), ki preprečujejo normalno delovanje telesa. V proteinurni fazi se amiloidi odlagajo v ledvično tkivo, uničujejo nefron in posledično renalni filter. Torej protein pride iz krvi v urin. Ta stopnja lahko traja več kot 10 let.
• Diabetična nefropatija. Zaradi nepravilnega metabolizma ogljikovih hidratov in lipidov se uničijo krvne žile, glomeruli in tubuli v ledvicah. Beljakovina v urinu je prvi znak napovedanega zapleta sladkorne bolezni.
• Bolezni vnetne geneze - nefritis. Najpogosteje lezije prizadenejo krvne žile, glomeruli in glodalski sistem, kar moti normalen potek filtracijskega sistema.
• Glomerulonefritis je v večini primerov avtoimunske narave. Bolnik se pritožuje zaradi zmanjšanja količine urina, bolečine v spodnjem delu hrbta in povečanega pritiska. Za zdravljenje glomerulonefritisa priporočamo prehrano, režim in zdravljenje z zdravili.
• Pyelonefritis. V akutnem obdobju se pojavijo simptomi bakterijske okužbe: mrzlica, slabost, glavobol. To je nalezljiva bolezen.
• Policistična bolezen ledvic.

V zdravem telesu beljakovinske molekule (in so precej velike) ne morejo skozi filtrirni sistem ledvic. Zato beljakovine v urinu ne bi smelo biti. Ta kazalnik je enak za moške in ženske. Če analiza kaže na proteinurijo, se je pomembno posvetovati z zdravnikom. Strokovnjak bo ocenil, koliko je raven beljakovin povišana, ali obstaja sočasna patologija, kako obnoviti normalno delovanje telesa. Po statističnih podatkih imajo ženske večje tveganje urogenitalne bolezni kot moški.

Načelo metode na osnovi koagulacije beljakovin v urinu v prisotnosti nitratne (ali 20% raztopine sulfosalicilne) kisline.

Napredek pri delu: 5 kapljic urina dodajte 1-2 kapljic dušikove (ali sulfosalicilne) kisline. V prisotnosti beljakovin v urinu se pojavi motnost.

Tabela Odkrivanje patoloških sestavin urina.

Opomba: v prisotnosti glukoze in beljakovin v pregledanem urinu se določi njihova kvantitativna vsebina.

Načelo metode: Ko beljakovina medsebojno deluje s pirogalol rdečim in natrijevim molibdatom, se oblikuje barvni kompleks, intenzivnost barve, ki je sorazmerna koncentraciji beljakovin v vzorcu.

Reagenti: Delovni reagent - raztopina pirogalol rdeče v sukcinatnem pufru, raztopina kalibracijske beljakovine s koncentracijo 0,50 g / l

Vzorci zmešamo, držimo 10 minut. pri sobni temperaturi (18-25 ° C). Izmerimo optično gostoto eksperimentalnega (Dop) in kalibracijskega vzorca (Dk) proti kontrolnemu vzorcu pri λ = 598 (578-610) nm. Barvanje je stabilno 1 uro.

Izračun: koncentracija beljakovin v urinu (C) g / l se izračuna po formuli:

kjer je: Dop = Dk = C = g / l.

Normalne vrednosti: do 0,094 g / l, (0,141 g / dan)

Načelo metode: Ko se D-glukoza oksidira z atmosferskim kisikom pod vplivom glukozne oksidaze, nastane ekvimolarna količina vodikovega peroksida. Pod vplivom peroksidaze vodikov peroksid oksidira kromogene substrate (zmes fenola in 4 aminoantipirina - 4ААP) z nastankom obarvanega izdelka. Intenzivnost barve je sorazmerna z vsebnostjo glukoze.

Glukoza + O2 + H2O glukonolakton + H2O2

2H2O2 + fenol + 4AAP barvana spojina + 4H2O

Napredek pri delu1 ml delovne raztopine in 0,5 ml fosfatnega pufra vnesemo v dve epruveti. V prvo epruveto dodamo 0,02 ml urina in v drugo dodamo 0,02 ml kalibratorja (umerjanje, standardna raztopina glukoze, 10 mmol / l). Vzorce zmešamo, inkubiramo 15 minut pri temperaturi 37 ° C v termostatu in optično gostoto eksperimentalnega (Dop) in kalibracijskega (Dk) vzorca proti delovnemu reagentu merimo pri valovni dolžini 500-546 nm.

Izračun: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Vsebnost glukoze v dnevnem urinu se določi z mmol / dan z množenjem rezultata, dobljenega z dnevnim volumnom urina.

Opomba Ko je vsebnost sladkorja v urinu več kot 1%, je treba razredčiti.

Trenutno biokemični laboratoriji uporabljajo poenoteno ekspresijsko metodo za analizo urina za glukozo z uporabo testa glukoze test reaktivnega glukoze ali z uporabo kombiniranih testnih trakov za pH, beljakovine, glukozo, ketonska telesa in kri. Testni trakovi se potopijo v posodo z urinom 1 sekundo. in primerjajte barvo na lestvici.

Določanje beljakovin z uporabo pirogalol rdečega indikatorja

Načelo metode temelji na fotometričnem merjenju optične gostote raztopine obarvanega kompleksa, ki nastane z medsebojnim delovanjem beljakovinskih molekul z molekulami kompleksa pirogalol rdeče barve in natrijevim molibdatom (kompleks Pyrogallol Red-Molybdate) v kislem mediju. Intenzivnost barve raztopine je sorazmerna z vsebnostjo beljakovin v preučevanem materialu. Prisotnost detergentov v reagentu zagotavlja enakovredno definicijo beljakovin različne narave in strukture.

Reagenti. 1) 1,5 mmol / l raztopine pirogalol rdeče (PGA): 60 mg PGA raztopimo v 100 ml metanola. Hraniti pri temperaturi 0–5 ° C; 2) 50 mmol / l raztopine sukcinatnega pufra pH 2,5: 5,9 g jantarne kisline (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g natrijevega oksalata (Na2C204) in 0,5 g natrijevega benzoata (C6H5COONa) raztopimo v 900 ml destilirane vode; 3) 10 mmol / l raztopine kristalnega hidrata natrijevega molibdata (Na2MoO4 × 2H2O): 240 mg natrijevega molibdata raztopimo v 100 ml destilirane vode; 4) Delovni reagent: v 900 ml raztopine sukcinatnega pufra dodamo 40 ml raztopine PHC in 4 ml raztopine natrijevega molibdata. PH raztopine nastavimo na 2,5 z 0,1 mol / l raztopino klorovodikove kisline (HCl) in prostornino nastavimo na 1 1. Reagent v tej obliki je pripravljen za uporabo in je stabilen pri temnem prostoru in pri temperaturi 2–25 ° C za 6 mesecev; 5) 0,5 g / l standardne raztopine albumina.

Potek odločnosti. V prvo epruveto vnesemo 0,05 ml preučevanega urina, v drugo epruveto dodamo 0,05 ml standardne raztopine albumina in v tretjo epruveto (kontrolni vzorec) 0,05 ml destilirane vode, v te epruvete dodamo 3 ml delovnega reagenta. Vsebino epruvet se zmeša in po 10 minutah se vzorec in standard fotometrirajo proti kontrolnemu vzorcu pri valovni dolžini 596 nm v kiveti z dolžino optične poti 10 mm.

Izračun koncentracije beljakovin v analiziranem vzorcu urina se izvede po formuli:

C = 0,5 × Apr / Ast,

pri čemer je C koncentracija beljakovin v analiziranem vzorcu urina, g / l; Apr in Ast - ekstinkcija preiskovanega vzorca urina in standardne raztopine albumina, g / l; 0,5 - koncentracija standardne raztopine albumina, g / l.

• barva raztopine (barvni kompleks) je stabilna eno uro;
• neposredno sorazmerno razmerje med koncentracijo beljakovin v vzorcu in absorpcijo raztopine je odvisno od vrste fotometra;
• kadar je vsebnost beljakovin v urinu nad 3 g / l, se vzorec razredči z izotonično raztopino natrijevega klorida (9 g / l) in določitev se ponovi. Pri določanju koncentracije beljakovin se upošteva stopnja razredčitve.

• Določanje beljakovin v urinu
• Preskušanje poenotene sulfosalicilne kisline
• Enotna Brandberg - Robertsova - Stolnikovova metoda
• Določanje količine beljakovin v urinu z reakcijo s sulfosalicilno kislino
• Biuretna metoda
• Odkrivanje v urinu Bens-Jonesove beljakovine

Proteinurija je pojav, pri katerem se beljakovine zaznajo v urinu, kar kaže na možnost poškodbe ledvic in je dejavnik razvoja srčnih, krvnih in limfatičnih bolezni.

Zaznavanje beljakovin v urinu ni vedno znak bolezni. Podoben pojav je značilen tudi za absolutno zdrave ljudi, pri katerih je mogoče zaznati beljakovine v urinu. Hipotermija, fizični napori, uživanje beljakovinskih živil vodijo do pojava beljakovin v urinu, ki izgine brez kakršnegakoli zdravljenja.

V času presejanja, 17% praktično zdravih ljudi določi beljakovine, vendar le 2% tega števila ljudi kaže pozitiven rezultat testa kot znak bolezni ledvic.

Proteinske molekule ne smejo vstopati v kri. Bistvenega pomena za telo so gradbeni material za celice, sodelujejo pri reakcijah, kot so koencimi, hormoni, protitelesa. Pri moških in ženskah je stopnja popolne odsotnosti beljakovin v urinu.

Funkcijo preprečevanja izgube beljakovinskih molekul v telesu opravljajo ledvice.

Pri filtriranju urina sodelujejo dva sistema ledvic:

1. glomeruli - ne pustite v velikih molekulah, vendar ne obdržite albumina, globulini - majhen delež beljakovinskih molekul;
2. ledvični tubuli - adsorbirajo beljakovine, filtrirane glomerule, vrnejo se v obtočni sistem.

Albumin (približno 49%), mukoproteini, globulini se nahajajo v urinu, pri čemer delež imunoglobulinov predstavlja približno 20%.

Globulini - beljakovine sirotke z visoko molekulsko maso, ki se proizvajajo v imunskem sistemu in jetrih. Večina jih sintetizira imunski sistem, nanaša se na imunoglobuline ali protitelesa.

Albumini so del beljakovin, ki se najprej pojavijo v urinu tudi z manjšo poškodbo ledvic. V zdravem urinu je določena količina albumina, vendar je tako nepomembna, da je ni mogoče odkriti z laboratorijsko diagnostiko.

Nižji prag, ki ga lahko ugotovimo z laboratorijsko diagnostiko, je 0,033 g / l. Če na dan izgubimo več kot 150 mg beljakovin, govorimo o proteinuriji.

Osnovni podatki za beljakovine v urinu

Bolezen z blago proteinurijo je asimptomatska. Vizualno se urina brez beljakovin ne razlikuje od urina, v katerem je majhna količina beljakovin. Malo penastega urina postane že z visoko stopnjo proteinurije.

Možno je domnevati aktivno izločanje beljakovin v urinu z bolnikovim videzom le z zmerno ali hudo stopnjo bolezni zaradi pojava edema okončin, obraza, trebuha.

V zgodnjih fazah bolezni so lahko posredni znaki proteinurije naslednji:

• razbarvanje urina;
• povečanje šibkosti;
• pomanjkanje apetita;
• slabost, bruhanje;
• bolečine v kosteh;
• zaspanost, omotica;
• povišane temperature.

Pojav takšnih znakov ni mogoče prezreti, zlasti med nosečnostjo. To lahko pomeni rahlo odstopanje od norme in je lahko simptom razvoja preeklampsije, preeklampsije.

Kvantificiranje izgube beljakovin ni lahka naloga in več laboratorijskih testov se uporablja za doseganje popolnejše slike o bolnikovem stanju.

Težave pri izbiri metode za odkrivanje presežka beljakovin v urinu so pojasnjene z:

• nizka koncentracija beljakovin, za katero je za priznavanje potreben zelo natančen instrument;
• sestava urina, ki otežuje nalogo, saj vsebuje snovi, ki izkrivljajo rezultat.

Največja informacija je podana z analizo prvega jutranjega dela urina, ki se zbira po prebujanju.

Na predvečer analize je treba izpolniti naslednje pogoje:

• Ne jejte začinjene, ocvrte, beljakovinske hrane, alkohola;
• izvzamete diuretik za 48 ur;
• omejitev telesne dejavnosti;
• skrbno upoštevajte pravila osebne higiene.

Jutranji urin je najbolj informativen, saj je dolgotrajen v mehurju, manj odvisen od vnosa hrane.

Količina beljakovin v urinu lahko analiziramo z naključnim delom, ki ga vzamemo kadarkoli, vendar je ta analiza manj informativna, večja je verjetnost napake.

Za kvantifikacijo dnevne izgube beljakovin se opravi analiza celotnega dnevnega urina. Če želite to narediti, v 24 urah, zbranih v posebno plastično posodo vse urin, ki za dan. Zbiranje lahko začnete kadarkoli. Glavni pogoj - točno dan zbiranja.

Kvalitativna definicija proteinurije temelji na denaturaciji proteina s fizikalnimi ali kemičnimi dejavniki. Kvalitativne metode se nanašajo na presejanje, ki omogoča ugotavljanje prisotnosti beljakovin v urinu, vendar ne daje možnosti za natančno oceno stopnje proteinurije.

Uporabljeni vzorci:

• z vreliščem;
• sulfosalicilna kislina;
• dušikova kislina, reagent Larionic na vzorcu Hellerjevega obroča.

Vzorec s sulfosalicilno kislino se izvede s primerjavo kontrolnega vzorca urina z izkušenim, pri katerem se urinu doda 7-8 kapljic 20% sulfosalicilne kisline. Ugotovitev o prisotnosti beljakovine je narejena glede na intenziteto opalescentne motnosti, ki se pojavi v epruveti med reakcijo.

Pogosteje uporabljen Geller test z uporabo 50% dušikove kisline. Občutljivost metode je 0,033 g / l. S tako koncentracijo beljakovin v epruveti z vzorcem urina in reagentom 2-3 minute po začetku poskusa se pojavi bel obroček, katerega tvorba kaže prisotnost beljakovin.

Semikvantitativne metode vključujejo:

• metoda za določanje beljakovin v urinskih testnih trakovih;
• Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Metoda določanja po metodi Brandberg-Roberts-Stolnikov temelji na metodi Geller obroča, vendar omogoča natančnejšo oceno količine beljakovin. Pri izvajanju testa s to tehniko več razredčitev urina doseže videz beljakovinskega obroča v časovnem intervalu med 2-3 minutami od začetka testa.

V praksi se testni trak uporablja kot indikator za barvno modro barvo. Pomanjkljivost testnih trakov je selektivna občutljivost na albumin, ki vodi do izkrivljanja rezultata v primeru povečanja koncentracije globulinov ali drugih beljakovin v urinu.

Slabosti metode so tudi relativno nizka občutljivost testa na beljakovino. Testni trakovi se začnejo odzivati ​​na prisotnost beljakovin v urinu pri koncentraciji beljakovin večji od 0,15 g / l.

Kvantitativne metode ocenjevanja je mogoče pogojno razdeliti na:

Metode temeljijo na lastnostih proteinov, da zmanjšajo topnost pod vplivom vezivnega sredstva z nastajanjem slabo topne spojine.

Sredstva, ki povzročajo vezavo na beljakovine, so lahko:

• sulfosalicilna kislina;
• trikloroocetna kislina;
• benzetonijev klorid.

Na podlagi rezultatov preskusov so sprejeti sklepi glede na stopnjo oslabitve svetlobnega toka v vzorcu z suspenzijo v primerjavi s kontrolnim. Rezultate te metode ni mogoče vedno pripisati zanesljivosti zaradi razlik v pogojih: hitrosti mešanja reaktantov, temperature, kislosti medija.

Učinek na ocenjevanje vnosa zdravil dan pred tem, preden se opravijo testi z uporabo teh metod, ni mogoče sprejeti: t

• antibiotiki;
• sulfonamidi;
• zdravila, ki vsebujejo jod.

Metoda se nanaša na razpoložljivo ceno, ki omogoča široko uporabo za pregled. Toda bolj natančne rezultate lahko dobimo z uporabo dražjih kolorimetričnih tehnik.

Občutljive metode, ki natančno določajo koncentracijo beljakovin v urinu, vključujejo kolorimetrične metode.

To lahko storite z visoko natančnostjo:

• biuretna reakcija;
• tehnika Lowry;
• Barvne tehnike, ki uporabljajo barvila, ki tvorijo komplekse z beljakovinami urina, ki se vizualno razlikujejo od vzorca.

Kolorimetrične metode za odkrivanje beljakovin v urinu

Metoda se nanaša na zanesljivo, zelo občutljivo, ki omogoča določanje v albuminu v urinu, globulinih, paraproteinih. Uporablja se kot glavna metoda za pojasnjevanje spornih rezultatov testov, kot tudi dnevne beljakovine urina pri bolnikih z nefrološkimi oddelki bolnišnic.

Še natančnejše rezultate lahko dosežemo z Lowryjevo metodo, ki temelji na biuretni reakciji, in Folinovi reakciji, ki v proteinskih molekulah prepozna triptofan in tirozin.

Da bi odpravili morebitne napake, vzorec urina očistimo z dializo aminokislin, sečne kisline. Napake so možne pri uporabi salicilatov, tetraciklinov, klorpromazina.

Najbolj natančna metoda za določanje beljakovin temelji na lastnostih, da se vežejo na barvila, ki se uporabljajo:

• ponceau;
• Coomassie briljantno modra;
• pirogalna rdeča.

Čez dan se količina beljakovin, ki se izloči v urinu, spreminja. Če želite bolj objektivno oceniti izgubo beljakovin v urinu, uvedite koncept dnevne beljakovine v urinu. Ta vrednost se meri vg / dan.

Za hitro oceno dnevne količine beljakovin v urinu, določimo količino beljakovin in kreatinina v eni porciji urina, nato pa razmerje beljakovin / kreatinina pridobimo iz izgube beljakovin na dan s razmerjem.

Metoda temelji na dejstvu, da je hitrost izločanja kreatinina v urinu konstantna, ne spreminja se podnevi. Pri zdravi osebi je normalno razmerje beljakovin: kreatinin v urinu 0,2.

Ta metoda odpravlja morebitne napake, ki se lahko pojavijo pri zbiranju dnevnega urina.

Kvalitativni testi pogosteje kot kvantitativni testi dajejo lažne pozitivne ali lažno negativne rezultate. Napake se pojavijo v povezavi z zdravili, prehranskimi navadami, telesno aktivnostjo na predvečer analize.

Dekodiranje tega kvalitativnega preskusa je podano z vizualno oceno motnosti v epruveti v primerjavi z rezultatom preskusa s kontrolno:

1. šibka pozitivna reakcija je ocenjena kot +;
2. pozitivno ++;
3. močno pozitiven +++.

Preizkus z Geller obročem natančneje ocenjuje prisotnost beljakovin v urinu, vendar ne omogoča kvantificiranja beljakovin v urinu. Kot pri preskusu s sulfosalicilno kislino Gellerjev test daje le približno idejo o vsebnosti beljakovin v urinu.

Metoda omogoča, da ocenimo stopnjo proteinurije kvantitativno, vendar preveč zamudno, netočno, saj se z močnim razredčenjem natančnost ocene zmanjša.

Da bi izračunali beljakovine, morate pomnožiti stopnjo razredčitve urina z 0, 033 g / l:

Test ne zahteva posebnih pogojev, ta postopek je enostavno narediti doma. Da bi to naredili, morate testni listič spustiti v urin 2 minuti.

Rezultati bodo izraženi s številom plusov na traku, katerega dekodiranje je v tabeli:

1. Rezultati testa, ki ustrezajo vrednosti do 30 mg / 100 ml, ustrezajo fiziološki proteinuriji.
2. Vrednosti na testnih lističih 1+ in 2 ++ pomenijo pomembno proteinurijo.
3. Vrednosti 3 +++, 4 ++++ so označene s patološko proteinurijo, ki jo povzročajo bolezni ledvic.

Testni trakovi lahko samo približno določijo povečano količino beljakovin v urinu. Ne uporabljajo se za natančno diagnostiko, še bolj pa ne morejo povedati, kaj to pomeni.

Ne dovolite, da testni trakovi ustrezno ocenijo količino beljakovin v urinu pri nosečnicah. Bolj zanesljiva metoda ocenjevanja je določitev beljakovin v dnevnem urinu.

Določanje količine beljakovin v urinu z uporabo testnih trakov: t

Dnevna beljakovina v urinu je natančnejša diagnoza ocene funkcionalnega stanja ledvic. Za to morate zbrati ves urin, ki ga izločajo ledvice na dan.

Vsebnost beljakovin v urinu najdemo po razmerju beljakovin: kreatinin, podatki so prikazani v tabeli:

Veljavne vrednosti za razmerje beljakovine / kreatinina so podatki v tabeli:

Z izgubo več kot 3,5 g beljakovin na dan se stanje imenuje masivna proteinurija.

Če je v urinu veliko beljakovin, je treba po enem mesecu ponovno pregledati, nato pa po treh mesecih, kar dokazuje, zakaj je norma presežena.

Vzroki za povečanje beljakovin v urinu je njegova povečana proizvodnja v telesu in kršitev ledvic, razlikovanje proteinurije: t

• fiziološki - manjša odstopanja od norme povzročajo fiziološki procesi, ki se spontano rešujejo;
• patološke - spremembe so posledica patološkega procesa v ledvicah ali drugih organih telesa, brez napredovanja zdravljenja.

Rahlo povečanje beljakovin je mogoče opaziti z obilico beljakovinske prehrane, mehanskimi opeklinami, poškodbami, ki jih spremlja povečana produkcija imunoglobulinov.

Blaga proteinurija lahko povzroči fizični napor, psiho-emocionalni stres ali jemanje določenih zdravil.

Fiziološka proteinurija je povečanje količine beljakovin v urinu pri otrocih v prvih dneh po rojstvu. Toda po enem tednu življenja se vsebnost beljakovin v urinu otroka šteje kot odstopanje od norme in kaže na razvoj patologije.

Bolezen ledvic, nalezljive bolezni se včasih spremlja tudi pojav beljakovin v urinu.

Takšna stanja običajno ustrezajo blagi stopnji proteinurije, so prehodni pojavi, hitro preidejo sami, brez posebne obravnave.

V hujših boleznih se v primeru: t

• glomerulonefritis;
• diabetes;
• bolezni srca;
• rak mehurja;
• multipli mielom;
• okužba, poškodba zdravil, policistična bolezen ledvic;
• visok krvni tlak;
• sistemski eritematozni lupus;
• Goodpasture sindrom.

Črevesna obstrukcija, srčno popuščanje in hipertiroidizem lahko povzročijo sledove beljakovin v urinu.

Sorte proteinurije so razvrščene na več načinov. Za kvalitativno oceno beljakovin lahko uporabimo klasifikacijo Yaroshevsky.

Glede na sistematiko Yaroshevskega, ki je nastala leta 1971, se proteinurija razlikuje:

1. ledvično - ki vključuje kršitev glomerularne filtracije, sproščanje beljakovin v tubulih, pomanjkanje ponovne adsorpcije proteinov v tubulih;
2. prerenalni - se pojavi zunaj ledvic, izločanje hemoglobina, beljakovine, ki se v krvi preveč pojavijo zaradi multiplega mieloma;
3. Postrenal - pojavi se na mestu urinarnega trakta po ledvicah, izločanje beljakovin pri uničenju sečil.

Za kvantitativno oceno, kaj se dogaja, so izolirane stopnje pogojno proteinurije. Ne smemo pozabiti, da lahko brez težav brez težav preidejo v težji.

Najhujša stopnja proteinurije se razvije z izgubo več kot 3 g beljakovin na dan. Izguba beljakovin od 30 mg do 300 mg na dan ustreza zmerni stopnji ali mikroalbumuriji. Do 30 mg beljakovin v dnevnem urinu pomeni blago proteinurijo.

Koliko beljakovin v urinu?

Normalni proteini v urinu so praktično odsotni (manj kot 0,002 g / l). Vendar pa se lahko v nekaterih pogojih majhna količina beljakovin pojavi v urinu pri zdravih posameznikih po zaužitju velike količine beljakovinskih živil, kot posledica hlajenja, s čustvenim stresom, dolgotrajnimi fizičnimi napori (ti marmorna proteinurija).

Pojav pomembne količine beljakovin v urinu (proteinurija) je patologija. Vzrok proteinurije je lahko bolezen ledvic (akutni in kronični glomerulonefritis, pielonefritis, noseča nefropatija itd.) Ali sečil (vnetje mehurja, prostate, ureterjev). Ledvična proteinurija je lahko organska (glomerularna, tubularna in prekomerna) in funkcionalna (febrilna proteinurija, ortostatska pri mladostnikih, pri prekomerni prehrani dojenčkov, pri novorojenčkih). Funkcionalna proteinurija ni povezana z ledvično patologijo. Dnevna količina beljakovin se pri bolnikih spreminja od 0,1 do 3,0 g ali več. Sestava beljakovin v urinu je določena z elektroforezo. Pojav beljakovine Bens-Jones v urinu je značilen za mielom in Waldenstrom makroglobulinemijo, 2 mikroglobulina v primeru poškodbe ledvičnih tubulov.

Normalni proteini v urinu so praktično odsotni (manj kot 0,002 g / l).

Glavni znaki bolezni, odkriti v študiji urina.

SG Specifična teža. Zmanjšanje specifične teže kaže na zmanjšanje sposobnosti ledvic, da koncentrirajo urin in izločajo toksine iz telesa, kot v primeru ledvične odpovedi. Povečanje specifične teže je povezano z veliko količino sladkorja v urinu, soli. Opozoriti je treba, da specifične teže ni mogoče oceniti le za en urinski test, lahko pride do naključnih sprememb, potrebno je opraviti 1-2 kratno analizo urina.

Proteinski proteini v urinu - proteinurija. Vzrok proteinurije je lahko poškodba ledvic same zaradi nefritisa, amiloidoze in poškodbe strupov. Proteini v urinu se lahko pojavijo tudi zaradi bolezni sečil (pielonefritis, cistitis, prostatitis).

Glukoza (sladkor) v urinu - glikozurija - najpogosteje zaradi sladkorne bolezni. Redkejši vzrok je poraz ledvičnih tubulov. Zelo zaskrbljujoče je, če so ketonska telesa odkrita skupaj s sladkorjem v urinu. To se zgodi s hudim, neustreznim diabetesom in je znanilec najtežjih zapletov sladkorne bolezni - diabetične kome.

Bilirubin, Urobilinogen Bilirubin in urobilin se določajo v urinu v različnih oblikah zlatenice.

Eritrociti Eritrociti v urinu - hematurija. To se zgodi bodisi s samim porazom ledvic, najpogosteje z njihovim vnetjem, bodisi pri bolnikih z boleznimi sečil. Če se npr. Kamen premika vzdolž njih, lahko poškoduje sluznico, v urinu se pojavijo rdeče krvne celice. Razpadajoči tumor ledvic lahko povzroči tudi hematurijo.

Levkociti Levkociti v urinu - levkociturija, najpogosteje posledica vnetnih sprememb v sečilih pri bolnikih s pielonefritisom, cistitisom. Levkociti pogosto določajo vnetje ženskih spolnih organov, pri moških, vnetje prostate.

Cilindri Cilindri so posebna mikroskopska struktura. Hialinske jeklenke v količini 1-2 lahko v zdravi osebi. Oblikujejo se v ledvičnih tubulih, zlepljeni so skupaj z beljakovinskimi delci. Toda povečanje njihovega števila, cilindri drugih vrst (zrnati, eritrociti, maščobe) vedno kažejo na poškodbo samega ledvičnega tkiva. Obstajajo valji pri vnetnih boleznih ledvic, presnovne lezije, kot je diabetes.

Informativna metoda in njene meje. Vsebina informacij o splošnem urinskem testu za prepoznavanje specifičnih bolezni ledvic je nizka, običajno zahteva dodatne, natančnejše študije. Toda raziskave so zelo pomembne, zlasti pri izvajanju preventivnih študij, saj omogoča identifikacijo zgodnjih znakov bolezni ledvic. Znano je tudi, da se pogosto pojavijo skrite ledvične bolezni in le študija urina jim omogoča, da sumijo in opravijo nadaljnje potrebne preglede.

V večini laboratorijev pri preiskovanju beljakovin z urinom najprej uporabite kvalitativne reakcije, ki v urinu zdrave osebe ne zaznajo beljakovin. Če se beljakovina v urinu odkrije s kvalitativnimi reakcijami, se izvede kvantitativna (ali polkvantitativna) določitev. Hkrati so pomembne značilnosti uporabljenih metod, ki pokrivajo različen spekter uroproteinov. Tako se pri določanju beljakovin z uporabo 3% sulfosalicilne kisline količina beljakovin šteje za normalno do 0,03 g / l, medtem ko se pri uporabi pirogalolove metode meja normalnih vrednosti beljakovin poveča na 0,1 g / l. V zvezi s tem je treba v obliki analize navesti normalno vrednost beljakovin za metodo, ki jo uporablja laboratorij.

Pri določanju najmanjših količin beljakovin je priporočljivo ponoviti analizo, v primeru dvoma je treba določiti dnevno izgubo beljakovin v urinu. Normalni dnevni urin vsebuje beljakovine v majhnih količinah. V fizioloških pogojih se filtrirani protein skoraj v celoti reapsorbira v epitelu proksimalnih tubulov in njegova vsebnost v dnevni količini urina se glede na različne avtorje razlikuje od sledi do 20 50, 80 100 mg in celo do 150 200 mg. Nekateri avtorji menijo, da je dnevno izločanje beljakovin v količini 30 50 mg / dan fiziološka norma za odraslega. Drugi menijo, da se izločanje beljakovin v urinu ne sme preseči 60 mg / m2 telesne površine na dan, razen prvega meseca življenja, ko je vrednost fiziološke proteinurije lahko štirikrat večja od navedenih vrednosti.

Splošni pogoj za pojav beljakovin v urinu zdrave osebe je njihova precej visoka koncentracija v krvi in ​​molekulska masa ne presega 100,200 kDa.

to ni norma, z vašo diagnozo je možno, druga stvar je, da je za nefrotski sindrom dejansko majhen indikator.. poglej kliniko - otekanje, pritisk itd., še naprej jemlje predpisano zdravljenje.

in vendar bom rekel: normalno je, da NE!